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在使用人elisa試劑盒前,這些要領(lǐng)一定要知道

發(fā)布時(shí)間: 2022-11-28  點(diǎn)擊次數(shù): 833次
  人elisa試劑盒具有高效、快捷、易批量操作等優(yōu)點(diǎn),不同的廠家提供不同種類(lèi),不同類(lèi)型的Elisa試劑盒產(chǎn)品,為科研用戶(hù)帶來(lái)極大的方便。人elisa試劑盒能夠針對(duì)特定檢測(cè)源,制備特異性抗原抗體,根據(jù)應(yīng)用需要量身定制檢測(cè)試劑盒,有效控制檢測(cè)試劑成本。
 
  實(shí)驗(yàn)原理:
  人elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)水平。用純化的待測(cè)物質(zhì)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測(cè)物質(zhì),再與HRP標(biāo)記的待測(cè)物質(zhì)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)濃度。
 
  人elisa試劑盒的計(jì)算:
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
 
  人elisa試劑盒在使用時(shí)的要領(lǐng):
  1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
  2、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
  3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間醉好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,醉好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第—孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)醉后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
  5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6、底物請(qǐng)避光保存。
  7、嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
  8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
  9、本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
  10、如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

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