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Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞

Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞

簡要描述:Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞
Rosetta(DE3)菌株具有氯霉素抗性,補充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)對應的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達水平。

更新時間:2022-01-20

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

瀏覽次數(shù):905

詳情介紹
品牌其他品牌貨號BFNC86073
規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應用領域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞



產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86073-01(10×100ul)/BFNC86073-02(50×100ul)


Rosetta(DE3):                                           100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期):                             -80℃(6個月)



基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm(DE3) pRARE(argU, argW, ilex, glyT, leuW, proL) (CamR)





產(chǎn)品說明

Rosetta(DE3)菌株具有氯霉素抗性,補充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)對應的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達水平,該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。

青旗生物生產(chǎn)的Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達108 cfu/μg DNA。


操作方法

1. Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。



Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞


IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

氯霉素

Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.


注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒時應輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

4. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。




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